抗原抗体 抗原抗体的应用

什么是抗原抗体呢，在我们生活中想必大家对于抗原抗体还是有所了解的吧，那么大家知道抗原抗体是什么吗，抗原抗体反应是什么呢，抗原抗体结合原理是什么呢，下面就让我们一起了解一下吧。

抗原与相应抗体的特异性结合反应。这种反应可以在体内进行，也可以在身体之外进行。抗原抗体反应过程是一系列的化学和物理变化，包括抗体特异性结合和非特异性聚集的2个阶段，以及亲水性胶体对疏水性胶体的变化。

特点

比例性是指抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系，只有当二者浓度比例适当时才出现可见反应，在抗原抗体比例相当或抗原稍过剩的情况下，反应彻底，形成的免疫复合物沉淀多、大。而当抗原抗体比例超过此范围时，反应速度和沉淀物量都会迅速降低甚至不出现抗原抗体反应。

可逆性是指抗原抗体结合形成复合物后，在一定条件下又可解离恢复为抗原与抗体的特性。由于抗原抗体反应是分子表面的非共价键结合，所形成的复合物并不牢固，可以随时解离，解离后的抗原抗体仍保持原来的理化特征和生物学活性。

应用

免疫动物

(1)抗原

免疫动物是制备抗血清的第一步。所使用的抗原的免疫反应可以是病毒，细菌或其他蛋白质的抗原，如果使用半抗原如小分子，如激素，必须与大分子载体连接。不同类型的抗原和动物的抗原的量，注射小鼠可以作为一个小的几微克，绵羊，甚至更大的动物，每一次相应的增加量，从几百克/倍到几毫克/倍。

〔2)佐剂及乳化

佐剂可以帮助抗原在注射部位缓慢释放，以增加免疫刺激的效果。佐剂有完全和不完全佐剂之分。完全佐剂加有灭活的分枝杆菌(如卡介苗)或棒状杆菌。福氏佐剂可从试剂公司购买，也可用羊毛脂和石蜡油按1：2—4混合自行制备。佐剂与抗原按1：1的比例混合乳化为均匀的乳液，放置后不会发生油水分离。

(3)免疫动物

常用于制备抗血清的动物打豚鼠、家免、小鼠、大鼠等，如果大量生产可用动物羊、马等，动物接受免疫的乳液量小鼠为1.0—2.0mL，家兔为2—4mL。抗原免疫动物的途径取决于动物种类、抗原特性和是否使用佐剂。

腹腔注射(i.p)，肌肉注射(i.m)，皮内注射(i.d.)和皮下注射(s.c.)适合于任何抗原，这些途径主要刺激局部淋巴结发生免疫应答，初次免疫和免疫加强注射均可使用。静脉注射(i.v.)则只适合于可溶性抗原及分散的单细胞悬液，且不能使用佐剂，其诱发的免疫应答主要发生在脾脏。

此外，在单克隆抗体制备时，亦可用脾脏直接注射或体外免疫方法，尤其对微量抗原比较实用。体外免疫方法也常用于人源单克隆抗体的制备。体外免疫时将脾细胞或外周血淋巴细胞(包括B细胞，T细胞及抗原递呈细胞)与抗原一起作体外培养，然后再与骨髓瘤细胞融合。

初次免疫后要经过2—3次以上的免疫加强以保证能形成较高水平的IgC抗体。两次免疫注射之间的时间间隔，一般3—4周比较适合大部分动物，小动物可间隔10—14d，大动物则在2月左右。在免疫加强后一次注射后的一周内采集抗血清，可获得高水平的抗体。

抗血清的纯化与保存

(1)采血

加强免疫的动物2—3次后，可通过耳静脉或眼球(小鼠)采血，进行抗血清效价测定。当效价达到理想的高度后，可以采血。采血方式可以从心脏直接取血，也可通过动脉放血。待血液凝固后用针筒或吸管吸取血清。

(2)抗血清的纯化与保存

除抗体外血清中含有多种其他蛋白成分。为了避免这些蛋白质干扰抗体(免疫球蛋白)标记反应和抗原抗体反应，抗血清可经过纯化以获得单一的机体(常为IgG)组分。常用的纯化IgG的方法为饱和硫酸胺盐析和层析法。

蛋白质在不同的盐浓度的溶液中，其溶解度不一样，盐离子干扰蛋白质和水分子间氢键形成，因为水—盐结合比水—蛋白质结合更稳定，蛋白质即可从溶液中沉淀出来。蛋白质分子越大，沉淀时所需盐离子浓度越低。